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                人S100A9蛋白(S100A9)ELISA試劑盒

                更新時間:2012-08-13  |  點擊率:2707

                 S100A9蛋白(S100A9)ELISA試劑盒

                 用于血清、血漿、細胞培養上清液和其它生物體液內

                 

                原理

                本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗人 S100A9 單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的 S100A9與單抗結合,加入生物素化的抗人S100A9,形成免疫復合物連接在板上,辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結合,加入底物工作液顯藍色,后加終止液硫酸,在450nm處測OD值,S100A9濃度與OD值成正比,可通過繪制標準曲線求出標本中S100A9濃度。

                試劑盒組成2-8保存)

                 

                酶標板(Coated Wells

                96

                酶標抗體工作液(Enzyme Conjugate

                12ml

                10×標本稀釋液(Sample Buffer

                12ml

                20×濃縮洗滌液(Wash Buffer

                50ml

                標準品(Standards):8ng/

                2

                底物工作液(TMB Solution

                12ml

                *抗體工作液(Biotinylated Antibody

                12ml

                終止液Stop Solution

                12ml

                 

                準備試劑與收集血樣

                1.          收集標本:血清、血漿(EDTA、肝素抗凝)、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8保存48小時;更長時間須冷凍(-20 -70 )保存,避免反復凍融。

                2.          標準品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成8000pg/ml的溶液。設標準管8管,每管加入標本稀釋液300ul。在*管中加入8000pg/ml的標準品溶液300ul混勻后用加樣器吸出300ul,移至第二管。如此反復作對倍稀釋,從第七管中吸出300ul棄去。第八管為空白對照。

                3.          10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。

                4.         洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)

                檢測程序

                1.          加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul,將反應板充分混勻后置37120分鐘。

                2.          洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。

                3.          每孔中加入*抗體工作液100ul。將反應板充分混勻后置3760分鐘。

                4.          洗板:同前。

                5.          每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置3730分鐘。

                6.          洗板:同前。

                7.          每孔加入底物工作液100ul,置37 暗處反應15分鐘。

                8.          每孔加入100ul終止液混勻。

                9.          30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。

                結果計算與判斷

                1.          所有OD值都應減除空白值后再行計算。

                2.          以標準品4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0 pg/ml為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。

                3.          根據樣品OD值在該曲線圖上查出相應S100A9含量。

                試劑盒性能

                             1.   靈敏度小的S100A檢測濃度小于30pg/ml。

                2.        特異性:可同時檢測重組或天然的人S100A9    。不與人其它細胞因子有交叉反應。

                3.        重復性:板內、板見變異系數均小于10%。

                注意事項

                             1.   以上標準孔及待測樣品均建議做復孔,每次測定應同時做標準曲線。

                 2.   洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致度誤差及OD值錯誤地升高。

                             3.   板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。

                             4.   本試劑盒宜置4oC冰箱保存。

                 5.   本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷!




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