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                乳酸脫氫酶(LDH)測試盒 常量可見分光光度法 說明 技術 文章

                更新時間:2019-06-04  |  點擊率:3231
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                乳酸脫氫酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)試劑盒

                商品貨號:QS1001
                英文名稱:Lacate Dehydrogenase(LDH)Assay Kit
                別名:乳酸脫氫酶試劑盒 LDH Kit 乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒 乳酸脫氫酶(LDH)測試盒
                檢測方法:常量法

                 

                商品貨號:商品品牌:規格基本售價選擇規格
                QS1001-50管/24樣 50管/24樣¥170.00元 

                 

                • 產品詳細介紹
                •  
                • 產品說明書

                 

                測定意義:

                LDH(EC 1.1.1.27)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,是糖酵解途徑的末端酶,催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應,伴隨著NAD+/NADH之間互變。

                測定原理:

                LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸進一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。

                貨號:QS1001                                                     規格:50管/24樣

                乳酸脫氫酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)試劑盒說明書

                分光光度法

                正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

                測定意義:

                LDH(EC 1.1.1.27)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,是糖酵解途徑的末端酶,催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應,伴隨著NAD+/NADH之間互變。

                測定原理:

                LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸進一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。

                自備實驗用品及儀器:

                可見分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

                試劑的組成和配制:

                提取液:30mL×1瓶, 4℃保存;

                試劑一:液體15 mL×1瓶, 4℃保存;

                試劑二:粉劑×1支,-20℃保存,用時加入1.3 mL雙蒸水充分溶解備用,配好后-20 ℃保存,可保存兩周,禁止反復凍融;

                試劑三:液體15 mL×1瓶,4℃保存;

                試劑四:液體50 mL×1瓶,4℃保存;

                操作步驟:

                一、樣品測定的準備:  

                1. 細菌或培養細胞:收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清,按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500-1000:1 的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次),8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
                2. 組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5-10 的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿;8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
                3. 血清(漿)樣品:直接檢測。

                二、測定操作:

                1. 分光光度計預熱30min以上,調節波長至450nm,蒸餾水調零。
                2. 樣本測定(在EP管中加入下列試劑)

                試劑名稱(μL)

                測定管

                對照管

                樣本

                50

                50

                試劑一

                250

                250

                試劑二

                50

                 

                蒸餾水

                 

                50

                充分混勻,37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴15min

                試劑三

                250

                250

                充分混勻,37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴15min

                試劑四

                750

                750

                充分混勻,室溫靜置3min,450 nm下測定吸光度,計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管需要設一個對照管。

                LDH活力單位計算:

                1. 標準條件下測定的回歸曲線, y = 0.725x (x為標準品濃度,μmol/mL;y為對吸光度)。
                2. 血清(漿)LDH活力的計算

                單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

                LDH(U/mL)=ΔA÷0.725÷T×103=92×ΔA

                1. 細胞、細菌和組織中LDH活力的計算
                1. 按樣本蛋白濃度計算:

                單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1 nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

                LDH(U/mg prot)=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (V1×Cpr) ÷T×103 =92×ΔA÷Cpr

                需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒。

                1. 按樣本鮮重計算:

                單位的定義:每g組織每分鐘催化產生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

                LDH(U/g鮮重)=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (W ×V1÷V2) ÷T×103 =92×ΔA÷W

                1. 按細菌或細胞密度計算:

                單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

                LDH(U/104 cell)= [ΔA÷0.725×V 1]÷(500 ×V1÷V2) ÷T×103 =0.184×ΔA÷W

                V1:加入反應體系中樣本的體積,0.05 mL;V2:加入提取液的體積,1 mL; T:反應時間,15 min;Cpr:蛋白質濃度,mg/mL;W:樣品質量,g; 500:細胞或細菌總數,500萬。

                 

                輔酶Ⅰ系列    
                QS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒可見分光光度法50管/24樣500
                MS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒微量法100管/48樣920
                QS1001乳酸脫氫酶(LDH)測試盒可見分光光度法50管/24樣170
                MS1001乳酸脫氫酶(LDH)測試盒微量法100管/48樣330
                QS1002NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣280
                MS1002NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測試盒微量法100管/96樣550
                QS1003NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣320
                MS1003NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測試盒微量法100管/96樣600
                QS1004NADH氧化酶(NOX)測試盒  可見分光光度法50管/48樣450
                MS1004NADH氧化酶(NOX)測試盒  微量法100管/96樣850
                QS1005-50檸檬酸合酶(CS)測試盒可見分光光度法50管/48樣3200
                QS1005-25檸檬酸合酶(CS)測試盒可見分光光度法25管/24樣2000
                MS1005檸檬酸合酶(CS)測試盒微量法100管/48樣3500
                QS1006丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒紫外分光光度法50管/48樣720
                MS1006丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒微量法100管/96樣1400
                QS1007醇脫氫酶(ADH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣280
                MS1007醇脫氫酶(ADH)測試盒微量法100管/96樣550
                QS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒紫外分光光度法50管/48樣800
                MS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒微量法100管/96樣1550
                QS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣420
                MS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒微量法100管/96樣800
                QS1010NAD激酶(NADK)測試盒可見分光光度法50管/48樣600
                MS1010NAD激酶(NADK)測試盒微量法100管/48樣1100
                QS1011線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒   紫外分光光度法25管/24樣1280
                MS1011線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒   微量法100管/96樣2500




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